Equipamentos de HPLC

Quando os investigadores revelam avanços científicos utilizando química analítica, ter o equipamento certo é pertinente para resultados fiáveis. Os testes de HPLC requerem equipamento especializado compatível com o seu analito. Para decidir que equipamento é necessário para o seu laboratório analítico, deve primeiro confirmar a sua metodologia com base na composição do material de amostra. As técnicas de HPLC podem ser refinadas para responder às suas necessidades específicas e com uma compreensão rigorosa da cromatografia pode desenvolver um fluxo de trabalho fiável.

A cromatografia líquida de elevado desempenho (HPLC) é uma técnica analítica útil para compostos de produtos químicos como pequenas moléculas e biopolímeros. Esta técnica envolve o estudo de uma amostra dissolvida numa solução, que é depois injetada numa coluna com resina que irá interagir com a amostra. Esta interação abranda o movimento da amostra pela coluna, onde é depois detetada. Os dados são derivados do momento do movimento da amostra e intensidade de deteção da amostra.

Para saber mais sobre para que é utilizada a HPLC, visite a nossa página em soluções de cromatografia. A Avantor oferece uma ampla seleção de recursos e produtos para o assistir nas suas necessidades.

Cromatografia líquida de elevado desempenho

De forma simples: a cromatografia líquida de elevado desempenho funciona com base no princípio de que os compostos individuais se comportam de forma diferente na água. HPLC separa e purifica compostos de acordo com a sua polaridade ou as suas propriedades hidrofóbicas/hidrófilas.

Existem dois tipos de cromatografia: de fase normal e de fase inversa. As diferentes composições de resina na coluna determinam o tipo de cromatografia a executar e que moléculas podem ser separadas.

Fase normal

Neste método, a coluna é cheia de partículas de sílica e um tampão não polar. Depois de a amostra ser injetada, as partículas polares aderem à sílica, apresentando um tempo de retenção mais longo do que as moléculas não polares.

Fase inversa

A coluna é cheia com partículas hidrofóbicas com um tampão polar ao efetuar cromatografia de fase inversa. As moléculas hidrofóbicas aderem à resina mais tempo e podem ser mais facilmente detetadas.

Utilização de produtos químicos para preparação de amostras laboratoriais

Existem três processos principais ao configurar uma amostra para análise por HPLC: diluição, centrifugação e filtração. Cada passo requer diferentes produtos químicos e quando planeado devidamente pode-se minimizar despesas e otimizar o seu protocolo. É essencial selecionar os produtos químicos adequados para preparação de amostras dado que isso pode ajudar a poupar tempo, dinheiro e recursos no seu laboratório.

Diluição

A chave da diluição correta de uma amostra é a determinação dos produtos químicos que melhor funcionam para o metabólito que lhe interessa. Um solvente pode apoiar uma classe de produto químico prejudicando ou diminuindo outra classe. A água e outros solventes são normalmente selecionados para isso. Por exemplo, os solventes orgânicos como o metanol ou acetonitrilo são usados para esmagar as proteínas e extrair pequenas moléculas simultaneamente.

Centrifugação

Este passo pode ajudar a preservar o seu equipamento de teste, protegendo a qualidade da sua amostra durante a filtração. A centrifugação funciona fazendo cair quaisquer partículas suspensas na parte inferior do tubo de amostra, usando um movimento de agitação vigoroso para misturar a solução.

Recomenda-se a mistura de uma amostra durante 5 minutos a uma velocidade máxima usando uma centrífuga de bancada. Assim minimizam-se desperdícios na recuperação de amostras filtradas e reduz-se o uso de consumíveis de filtração dispendiosos que muitas vezes exigem durações maiores de filtração. Embora a centrifugação não exija produtos químicos adicionais, reduz significativamente a quantidade necessária noutras etapas.

Filtração

Um laboratório analítico pode executar centenas de amostras semanalmente, requerendo resultados rápidos e precisos. Este equilíbrio entre o ritmo e a qualidade é fortemente afetado pelas técnicas de filtração.

A filtração é importante para uma preparação adequada de amostras com HPLC por duas razões principais: proteger a bomba de particulados no solvente e evitar que as partículas entupam e danifiquem a coluna de HPLC.

O uso de solventes pré-misturados e filtrados pode minimizar o potencial de contaminação através do solvente. Este nível de pureza ajuda a minimizar a manutenção necessária do seu equipamento. Ao adicionar um passo de filtração antes de carregar a sua amostra na coluna ou no ponto de recolha pode reduzir os erros devido a contaminação e proteger o seu equipamento de desgaste a longo prazo.

Seleção de produtos químicos para preparação de amostras com HPLC

O estabelecimento de uma técnica eficiente de preparação de amostras por HPLC é crucial para extrair produtos químicos purificados e com as reações necessárias com os seus compostos-alvo.

Os solventes como acetonitrilo, metanol e água muitas vezes são usados na preparação de amostras, com o objetivo de filtração. Alguns dos melhores solventes para análise por HPLC são controlados a nível de qualidade para transparência de UV apoiando uma sensibilidade ideal, sendo-lhes retiradas as impurezas metálicas que muitas vezes afetam a atividade biológica da amostra.

Ao assegurar produtos químicos para filtração adequada irá melhorar a velocidade de teste e muitas vezes eliminar equipamento e recursos adicionais usados para filtrar ainda mais uma amostra que pode ter tendência a contaminação.

Seleção de solventes para evitar a contaminação

Escolher as soluções químicas certas pode ser central para evitar contaminantes na sua amostra de HPLC que irão distorcer os resultados de teste e danificar o seu equipamento. Os extraíveis são compostos libertados de um componente, como uma membrana de filtro, em contacto com o solvente da amostra. A quantidade de extraíveis varia de acordo com a resistência ao solvente do componente, bem como com as temperaturas e pressões envolvidas.

Os extraíveis podem afetar a precisão de HPLC interferindo na análise se forem detetáveis pelo método analítico a jusante. Estes compostos introduzem dados de ruído, reduzindo a qualidade de dados global. Isso pode ser especialmente problemático quando o analito-alvo tem o mesmo tempo de retenção do extraível.

A confirmação de que a membrana de filtração possui uma elevada compatibilidade química com os solventes de fase móvel pode reduzir significativamente os extraíveis.

A membranas de politetrafluoroetileno (PTFE), poli(fluoreto de vinilideno) (PVDF) e celulose regenerada (RC) são escolhas populares, dado que são altamente compatíveis com solventes de fase móvel comuns. A água purificada, acetonitrilo e metanol são as escolhas populares para solventes.

Outras forma de evitar a contaminação é reduzir a variação dos materiais no laboratório. A padronização de dois tipos de membrana e respetivo uso em vários formatos irá apoiar a consistência no laboratório.

Pode usar os mesmos materiais da membrana nos círculos de membrana na filtração de fase móvel, filtros de seringa para preparação manual e filtros sem seringa para filtração automática. Isso significa uma diminuição do número de consumíveis que têm de ser armazenados, minimizando os requisitos de espaço e o incómodo de reabastecimento de uma diversa lista de consumíveis.

Saiba mais sobre Equipamento de HPLC e todos os recursos de teste analítico através da Avantor^®.

Conclusão

O acesso a equipamentos de HPLC para processamento em larga escala ou pesquisa de vanguarda deve ser simples.. A Avantor^® fornece produtos químicos de alta qualidade e ferramentas de recurso para apoiar o sucesso do seu laboratório.

O manuseamento correto dos produtos químicos de laboratório para HPLC é também uma consideração importante quando se adquire equipamento e se mantém o controlo de qualidade. Para mais informações sobre o manuseamento de produtos químicos comuns de laboratório, visite a nossa página sobre Produtos químicos de laboratório e suas utilizações.

Para todas as suas necessidades de equipamentos e produtos químicos, a Avantor® tem a resposta.